GSH Vsebnost Protokoli
glutation ali GSH jebeljakovine v obeh rastlin in živali . Deluje za pomoč encimskih reakcij v razstrupljanje onesnaževalci okolja . Poleg tega , da omogoča prevoz aminokislin v celice in pomaga vzdrževati beljakovin reakcije zmanjšanje sulfhidril . GSH Analiza protokolov uporabo GSH odbojnikov , standardi , podlaga, encimov in reagentov . Po poseben postopek , nanaša na izid testa . Encimska Recikliranje Metoda
encimska metoda recikliranja , za GSH , uporablja glutation reduktazo količinsko GSH . Ta protokol je posebej za plazme, tkiva ali kultiviranih vzorcev celic . Dodamo DTNB reagenta ( 5 – 5′ – ditio -bis – 2 – nitrobenzojsko kislino) GSH . Sulfidril skupino v GSH reagira z reagentom in daje rumeni kislino imenovano 5 – tio- 2 – nitrobenzojsko kislino ( TNB ) . Dodaj glutation reduktaze v kislinski in GSH zmesi za recikliranje GSH in proizvajajo več kisline . V tem postopku ,stopnja kisline proizvodnje je sorazmerna z reakcijo recikliranja GSH ; Zato izmerimo absorbanco TNB kislino z uporabo spektrofotometra . Absorpcija zagotavlja oceno dejanske višine GSH v vzorcu.
Jetrnih celic Glutathione Vsebnost
Ta protokol analizira količino GSH v človeški najetrih ( rak jeter celice). Za izvedbo tega postopka , uporabite kolorimetrične metode za določanje GSH za zmanjšanje in oksidirajo GSH . Zmanjšanje GSH z uporabo 5 – 5′- ditiobis ( 2 – nitrobenzojsko kislino ali DTNB ) v obliko
obarvan produkt 2 – nitro – 5 – thiobenzoic kislino in oksidiran glutation ( GSSG ) . Uporaba glutation reduktazo zmanjšati GSSG , da se ponovno tvori GSH . Da bi izmerili količino GSH v jetrnih celicah , preberite vzorca pri 415 absorbance kinetično na mikroploščnega čitalnika .
Apoptoza celic
V tem Protokol , ki je GSH uporablja za odkrivanje apoptozo celic (smrt ) z merjenjem zmanjšanja omejeno GSH . Zmanjšanje koncentracije celične GSH jepokazatelj celične smrti . Madež vzorčne celice non- fluorescenčne thiolite zeleno. Thiolite zeleno kopiči v citosolu (celica plazma ) in mitohondrije ( Elektrarna ) celice. Uporabite tok citometra na 490/520 nanometrov vizualizirati količino GSH v celicah.
Skupna koncentracija GSH v živalskih in rastlinskih vzorcev
merjenje koncentracije skupno GSH tako zniža, in oksidirani obliki v različnih živalskih in rastlinskih vzorcev. Dodaj splošno tiolno reagent, 5 – 5′ – ditiobis- [ 2 – nitrobenzojska kislina] . Tiol reagent reagira z GSH , da nastane 412 nm kromoforom , 5 – thionitrobenzoic kislino ( TNB ) in GS- TNB . Dodaj glutation reduktazo in beta – nikotinamidadenindinukleotidfosfata (NADPH ), za zmanjšanje GS- TNB . Glutation bo tudi javnost drugo TMB molekule in recikliranje GSH . Poleg tega je katerikoli oksidiran GSH ( GSSG ) v zmesi prisotna fromed od disulfidne reakcije zmanjša tudi GSH . Uporabite bralnik mikroploščnega na 405 nanometrov , da se glasi raven absorbance in navesti skupno koncentracijo GSH .