Sušenje Metode protokol za PVDF

Ko vezavo nukleinskih kislin ali proteinov ,high- vezivni material, imenovan PVDF ( polivinil difluorid ) membrana zagotavlja podporo za protiteles. Skozi Western blot , se membrane zloži skupaj , pripravljeno za protitelesa in nato posušimo . Protokol za sušenje membrane zahteva znanje o tem, kako membrane delo , katodne plošče, anode plošče in uporabo metanola rešitev. S pravilnim protokolom ,membrana varno veže s specifično protitelo in je pripravljena za takojšnjo uporabo ali skladiščenje . Priprava membrane

Priprava PVDF membrano očisti in stabilizira membrano pred prenosom. Pred sušenjem , semembrana ” blokira ” za preprečevanje vezave od nič drugega kot posebne nukleinskih kislin , kot nespecifičnih protiteles . V tem postopku mokre membrane z njeno polaganje na ravno podlago, za katere je v metanolu . Membrane spremeni barvo v tem stavku , od prepušča semitransparentni . Po kratkem končali z metanolom kopeli , semembrana nahaja v deionizirani vodi namakati približno dve minuti . Membrana mora nato ponovno namočite v raztopino metanola , ki je zelo kisla.

Zbor membrane pred prenosom

Dva membranskih dokumentov namakamo v prvi raztopini metanola in dan na anodno ploščo . Med tem procesom , morate skrbno preveriti, ujetih zračnih mehurčkov , ki bi lahko ogrozila prenos . Še en filtrirni papir se namaka v drugi raztopini metanola in namestili na vrh dimnika . Gel nato gre na vrh membrane , s pazimo, da ne past zračnih mehurčkov med uporabo gela in membrano . Tri nove koščke je nato namočena v katodni pufru in namestimo na vrh gela . Če pride do zraka bubbling ,epruveta dela za nemoteno iz membran .
Prenos

V tem delu procesa , se povežete z visoko napetostjo kable za napajanje in uporablja konstanten tok na področju gela na membrano 30 minut. Prenos časi se spreminja glede na tip protitelesa . Po 30 minutah , odstranite napajalnik in prenos membrano . Spodnjem desnem kotu membrane prereže , da preverite usmerjenost . Prvi dve plasti filtrirni papir, se zavržejo , vključno z gelom . Pasovi za molekulsko maso so označeni s kemičnim svinčnikom .
Sušenje

Ko je prenos končan, se posuši membrane na enega od dveh načinov. Za hitrejše sušenje , semembrana namaka v 100 -odstotnega metanola za 10 sekund , da odstranite vse vode. Trak nato počiva na kos papirnato brisačo za 15 minut . Za počasnejšo metodo sušenja , semembrana postavi na papirnato brisačo brez dodajanja metanola . Ko je posušen , se lahkomembrana se uporabljajo ali hranijo v suhi posodi pri 4 stopinjah Celzija za prihodnjo uporabo .