Kako uporabljati Sanger reagentov

je reagent Sanger se uporablja , da bi ugotovili zaporedje aminokislin , ki sestavljajo peptid . Reagent bo zapah na – ali tag – amino kislina na samem koncu peptidne verige , znan tudi kot N-terminalu . Peptid nato razdeli na kose ( hidroliziran ) in posamezne aminokisline pregledamo različne metode kromatografije. Ne glede na aminokislinsko nositag jeeden konec . Reagent Sanger je znana tudi kot dinitrofluorobenzen ( DNFB ) . Ko je zapahnjena na amino kisline , se imenuje DNP – compound.Things kar potrebujete
laboratorijskem merilu
Rokavice
zaščitna očala
centrifuga
Centrifuga cevi
Pasteur pipete
destilirano vodo
4,2 % raztopino natrijevega bikarbonata jezik Sanger reagenta ( FDNB )
pH papirja
dietiletrom
6M raztopino solne kisline
aceton
testu cev
Proste Prikaži več navodil

1

odtehtamo 3 miligrams peptida na lestvici . Postavite ga v epruveto za centrifugiranje . Dodamo približno 0,3 ml vode, 0,3 ml Sanger reagenta in 0,075 ml natrijevega bikarbonata .
2

Pustimo centrifugirki inkubirati pri sobni temperaturi eno uro . Med inkubacijo , stresemo cevko previdno , da se prepreči mešanico ločevanje . Preverimo pH raztopine vsakih 15 minut s pH papirju . PH je treba hraniti nad 9 . Če se začne upadati , dodamo majhno količino natrijevega bikarbonata ( približno ena kapljica z Pasteur pipete ).
3

Po inkubaciji dodamo 1,5 ml vode inenako količino etra . Pustite, darešitev za ločevanje v plasteh. Morda boste morali zmes centrifugira , da se ločijo. Odstranite sloj etra (top , rumena plast ) s pipeto in ga zavrzite.
4

pH uravnamo do 1,0 s počasnim dodajanjem solne kisline . Dodajte malo kisline v času , nežno premešamo , nato pa preverite pH s pH papirja. Skupaj naj bi zahtevalo okoli 0,15 ml kisline . Če je pH pade pod 1,0 , dodamo majhno količino (ne več kot kapljico ) natrijevega bikarbonata .
5

Doda se 3 ml etra . Pustimo, da se zmes loči . Zdajvrhnja plast (rumena, eter plast) vsebuje vaše DNP – spojine . S pipeto pazljivo izvleči ta sloj in ga prenesemo v čisto epruveto . Postavite epruveto razveljavi in pustite , da tekočina izhlapi , za seboj zapustilisuha , rumena trdna snov .
6

umijte trdna z acetonom . Dodajte 0,3 mililiters acetona , nežno premešamo in izvleči tekočino s pipeto. Dodajte 0,75 mililiters za kisline v epruveti. Vaš peptid je sedaj označujejo in pripravljena za hidrolizira in analizirali z metodo kromatografije po vaši izbiri .