Prednosti in slabosti Western Blot
Western blot , analizne tehnike , ki se uporablja za točno določen protein v določenem vzorcu , zaposluje sposobnost encima ali – fluorescenčno označene primarnega protitelesa veže na njegovo specifičnega antigena . To jepostopek v treh korakih , ki se začnejo z gelsko elektroforezo , čemur sledi membrane sušenjem in sondiranje s protitelesi . Odkrivanje beljakovin lahko neposredno ali posredno, s pomočjo slednjih označeno sekundarno protitelo, usmerjeno proti primarni . Čeprav je sprejeta kot rutinsko analizo beljakovin tehniko , western blot ima svoje omejitve , kot tudi koristi. Prednost: Občutljivost
Ena od največjih argumentov v prid Western Blot je njegova občutljivost . Zaradi svoje sposobnosti za odkrivanje tako malo kot 0,1 nanogramov proteina v vzorcu, ki lahkotehnika teoretično služi kot učinkovito predčasnega diagnostično orodje , zaznavanje tudi najmanjše imunogeni odziv na virus ali bakterije v vzorcu pacienta . Posredni western blot nadalje gradi na tem občutljivosti od sposobnosti Sekundarno protitelo , da ojača jakost signala , ki ga sistem za slikanje odkrita . Večja občutljivost pomeni, da je potrebnih manj protitelesa za testiranje , kar precej zmanjša stroške laboratorijskih bistveno
Advantage . Specifičnost
Western blot dolguje svojo specifičnost za dve veliki prispevanje dejavniki. Najprej gel elektroforeza razvrsti vzorca v proteinov različnih velikosti , brezplačno in zgradbe . Ta proces je samo po sebivelik korak odkrivanja , kot pasovi oblikovani v gelu že daje namige o velikosti proteina ali polipeptida . Specifičnost interakcije protiteles antigen služi kot drugi velik faktor . Ker je specifična protitelesa kažejo afiniteto za posebne proteine , lahkoproces selektivno odkrivanje tarčnega proteina , tudi v mešanici 300.000 različnih proteinov kupi kupi Slabost: . Leže z lažnimi ali subjektivnih rezultatov
kljub svoji občutljivosti in specifičnosti ,western blot lahko še vedno povzročijo napačne rezultate. A lažno pozitivni rezultati , koprotitelo reagira z nenamerno beljakovin, kar je tisto, kar se pogosto zgodi, ko sebolnik testirajo za HIV se zgodi, da ima tuberkulozo ali več zajedavci . Lažno negativni , na drugi strani , lahko zlahka povzroči , če Večje beljakovine ni dovolj časa, da ustrezno prenese na membrano . Nepravilno odtisi in obdelava pogosto proizvajajo špila , blede ali celo več pasov , zaradi česar rezultati testov predmet razlage tehnik
Slabost: . Visoke stroške in tehnično Povpraševanje
< p >strošek western Blot jesestavljen iz velikih posameznih izdatkov za označenih protiteles , usposobljenih analitikov in laboratorijske opreme . Občutljiv proces , western blot zahteva natančnost pri vsakem koraku za pravilno identifikacijo sestavin vzorcu je . Manjše napake v koncentraciji reagenta ali v inkubacijski dobi, je lahko katastrofalne posledice za celoten proces . Končno,oprema, potrebna za odkrivanje in slikanje – kemiluminescenčni , svetleče , radioaktivni , ali sistemi za odkrivanje laserskih – je lahko predraga za povprečnega mikrobiologije enote
.