Bazalni Dejavnost SP6 Promotor

In vitro poskusi so tisti, ki se izvajajo zunaj živega organizma v epruveti ali podobnem okolju . Znanstveniki lahko RNA kopij ali prepis gena in vitro v procesu, imenovanem vitro transkripcijo . Encim, ki omogoča zapis RNA , ki temelji na gen se imenujeRNA polimerazo . Ena takšna molekulaSP6 polimeraza . To zahteva odsek DNK, ki se imenuje SP6 promotor , da bi deloval pravilno . Promotorji

promotorregijo DNA z RNA-polimerazo zavezuje , da sproži transkripcijo . SP6 polimerazo zahteva, da jezelo specifično zaporedje prisotno v promotor , ki je zavezujoč , tako da je priSP6 polimerazo uporabljajo za in vitro transkripcijo , mora bitigen vsebuje SP6 promotor za nadzor , da se pojavijo transkripcija . SP6 polimeraza od tipa virusa imenovanegabakteriofag ; biotehnološka podjetja proizvajajo to polimerazo , ki jih okužili s salmonelo bakterij z fag in nato izolacijo polimerazo .
Expression

Bazalni izraz ali dejavnost, se nanaša na raven izražanja v odsotnosti druge molekule, ki bo zvišajo ali znižajo stopnjo transkripcije . Aktiviranje in represorji , na primer proteini , ki se lahko veže na promotor ali drugih genskih regulatorne regije , ki so bodisi v pomoč pri rekrutirati polimeraze RNA ali preprečujejo vezavo . Spodbujevalci so molekule, ki spodbujajo nastajanje genskega produkta z zvišanjem ravni izražanja.
SP6

Bazalni dejavnost za SP6 promotorja bo odvisno od pogojev vaš poskus. Najbolj pomembno vprašanje , seveda, je, kako lahko vaši eksperimentalni pogoji vplivajo na aktivnost in kako SP6 primerja z drugimi sistemi . Na splošno velja , SP6 polimerazo in promotorji dostaviti manjšo učinkovitost kot T7 in T3 in vitro transkripcijo sistemov , čeprav v idealnih pogojih SP6 je približno primerljiv s teh drugih dveh. Tako kot SP6 , tako T7 in T3 uporabo RNA -polimerazo iz bakteriofagov .
Pogoji

koncentracija soli in temperatura sta pomembna dejavnika pri določanju bazalno aktivnost . SP6 je zelo občutljiv na koncentracijo soli , tako da višje koncentracije soli , lahko zmanjšajo svojo dejavnost v veliki meri . Vse ostalo ostane enako , izražanje je bistveno večja pri 104 stopinjah Celzija , kot na 99 stopinj Celzija . Koncentracija nukleotidov, je še en pomemben vidik . Nizke koncentracije lahko potencialno povzroči prepis predčasno prekine in s tem zmanjšala svojo učinkovitost. Povečanje koncentracije nukleotidov bodo temu problemu izognile . Če ste sinteze RNA sond , pa je dodal, preveč neoznaćenega nukleotide, ki bo zmanjšala količino označenega nukleotida v končnem izdelku .